ओलिगो शुद्धि के लिए शुद्धिकरण उपकरण

1. जेल वैद्युतकणसंचलन क्रोमैटोग्राफी शुद्धि
शुद्धिकरण के लिए डिनेचरिंग पॉलीएक्रिलामाइड जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस क्रोमैटोग्राफी का उपयोग करें।डिनाट्यूरिंग एजेंट आम तौर पर 4M फॉर्मामाइड या 7M यूरिया होता है, एक्रिलामाइड की सांद्रता 5-15% के बीच होती है, और मेथैक्रिलामाइड का अनुपात मुख्य रूप से 2-10% के बीच होता है।
वैद्युतकणसंचलन के बाद, पराबैंगनी प्रकाश के विकिरण के तहत न्यूक्लिक एसिड बैंड की स्थिति निर्धारित करने की आवश्यकता होती है, लक्ष्य न्यूक्लिक एसिड युक्त जेल को काट दिया जाता है, न्यूक्लिक एसिड को तोड़ दिया जाता है और लीच किया जाता है, और फिर लीचिंग समाधान को केंद्रित किया जाता है, डीसाल्टेड किया जाता है, परिमाणित और लियोफ़िलाइज़्ड।

2. डीएमटी-ऑन, एचपीएलसी शुद्धिकरण
संश्लेषण के दौरान डीएमटी-ऑन मोड चुनें, अमीनोलिसिस के बाद अतिरिक्त अमोनिया को हटाने के लिए कच्चे उत्पाद को सेंट्रीफ्यूज किया गया और कमरे के तापमान पर केंद्रित किया गया।
एलुएंट के रूप में एसीटोनिट्राइल और 10% ट्राइथाइलमाइन-एसिटिक एसिड (TEAA) के साथ C18 कॉलम का उपयोग करके पृथक्करण किया गया था।निक्षालन पूरा होने के बाद, इसे केंद्रित किया जाता है, और फिर डीएमटी समूह को ट्राइफ्लूरोएसेटिक एसिड के साथ हटा दिया जाता है।उदासीनीकरण के बाद, कुछ लवण और छोटे अणुओं को एक कट-ऑफ ट्यूब के माध्यम से हटा दिया जाता है, और अंत में अलवणीकरण किया जाता है।

इस विधि से उच्च शुद्धता वाला उत्पाद प्राप्त किया जा सकता है, लेकिन शुद्धिकरण की घटना पर ध्यान देना आवश्यक है।

3. डीएमटी-ऑफ, एचपीएलसी शुद्धि
संश्लेषण के दौरान डीएमटी-ऑफ चुनें, और अमोनोलिसिस के बाद अतिरिक्त अमोनिया को हटाने के लिए कच्चे उत्पाद को सेंट्रीफ्यूज किया गया और कमरे के तापमान पर केंद्रित किया गया।
एलुएंट के रूप में पानी में एसिटोनिट्राइल और 10% ट्राइथाइलमाइन-एसिटिक एसिड के साथ C18 कॉलम का उपयोग करके पृथक्करण किया गया था।पृथक्करण पूरा होने और मात्रा निर्धारित होने के बाद, एलिकोट्स को लियोफिलाइज़ किया जाता है।

इस विधि में पृथक्करण स्थितियों के सावधानीपूर्वक समायोजन की आवश्यकता होती है, और यह अपेक्षाकृत शुद्ध लक्ष्य अणु भी प्राप्त कर सकता है।