न्यूक्लिक एसिड संश्लेषण के सिद्धांत

न्यूक्लिक एसिड संश्लेषण ठोस चरण सियालिक एमाइड ट्राइग्लिसराइड विधि का उपयोग करके किया जाता है, जिसके तहत डीएनए के 3′ सिरे को एक ठोस चरण सब्सट्रेट पर स्थिर किया जाता है और न्यूक्लियोटाइड को 3′ से 5′ दिशा में तब तक जोड़ा जाता है जब तक कि वांछित डीएनए टुकड़ा संश्लेषित न हो जाए। .यह डीएनए पोलीमरेज़ के अनुप्रयोग द्वारा डीएनए संश्लेषण से भिन्न है।

संश्लेषण के दौरान पहले आधार के 3′ सिरे को सीपीजी पर स्थिर किया जाता है, अगले आधार के 5′-ओएच को डी-पी-टोलिल ट्राइटिल डीएमटी से संरक्षित किया जाता है, आधार पर अमीनो समूह को बेंजोइक एसिड और 3′ से संरक्षित किया जाता है। -OH को फिर अमीनो फॉस्फेट यौगिक के साथ सक्रिय किया जाता है।1 बेस के 5 5′-OH का 1 बेस और अगले बेस का 3′-OH एक फॉस्फाइट ट्राइग्लिसराइड बनाता है, जिसे फिर आयोडीन के साथ फॉस्फेट ट्राइग्लिसराइड में ऑक्सीकृत किया जाता है, दूसरे बेस 5′-OH पर प्रोटेक्टेंट को हटा दिया जाता है। अगले बेस को जोड़ने के माध्यम से डाइक्लोरोएसिटिक एसिड डीएम चक्र को जोड़ना, और संश्लेषण के बाद 5′-OH पर प्रोटेक्टेंट को एक कमजोर एसिड के साथ हटा दिया जाता है टुकड़े को ठोस राल से केंद्रित अमोनियम हाइड्रॉक्साइड के साथ अलग कर दिया जाता है, प्रोटेक्टेंट को बेस से हटा दिया जाता है गर्म करने पर सांद्र अमोनियम हाइड्रॉक्साइड के साथ, अमोनियम हाइड्रॉक्साइड हटा दिया जाता है, टुकड़े को वैक्यूम में सुखाया जाता है, और न्यूक्लिक एसिड को तरल क्रोमैटोग्राफी या पेज द्वारा शुद्ध किया जाता है।

ओलिगो संश्लेषण के चरण

डीब्लॉकिंग

टीसीए समाधान जोड़कर 5 अंत डीएमटी सुरक्षा समूह को हटा दिया गया है।

सक्रियण

सक्रिय ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड मोनोमर इंटरमीडिएट बनाने के लिए एक्टिवेटर को ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड मोनोमर के साथ मिलाना।

युग्मन

5-टर्मिनल हाइड्रॉक्सिल समूह एक अस्थिर फ़ॉस्फाइट ट्राइग्लिसराइड बंधन बनाने के लिए एक एंटी-जनरेटिव संक्षेपण प्रतिक्रिया में सक्रिय ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड मध्यवर्ती के साथ प्रतिक्रिया करता है।

कैपिंग 

कैपिंग एजेंट को जोड़ने से अतिरिक्त हाइड्रॉक्सिल समूहों के साथ एसिटिलेशन कैपिंग प्रतिक्रिया होती है जो संक्षेपण प्रतिक्रिया में शामिल नहीं होते हैं।

ऑक्सीकरण 

पानी युक्त आयोडीन घोल मिलाने से ऑक्सीकरण द्वारा अस्थिर फ़ॉस्फाइट बंधों के साथ प्रतिक्रिया होकर स्थिर फ़ॉस्फ़ोरिक एसिड ट्राइग्लिसराइड बंध बनते हैं।

सायनोइथाइल दरार

संश्लेषण के बाद न्यूक्लिक एसिड उत्पाद, फॉस्फेट ट्राइग्लिसराइड बंधन से सायनोइथाइल समूह को हटाने के लिए डीईए समाधान के साथ।

विच्छेदन एवं संरक्षण

न्यूक्लिक एसिड के टुकड़ों को ठोस चरण वाहक से एक केंद्रित अमोनियम हाइड्रॉक्साइड समाधान जोड़कर अलग किया जाता है और फिर आधारों के हाइड्रोजन बांड से सुरक्षात्मक समूहों को हटाने के लिए गर्म किया जाता है।